Генетическая модификация, в том числе генетическое редактирование, — мощный инструмент фундаментальных и прикладных исследований. Однако, несмотря на простоту идей, лежащих в основе этих методов, их адаптация к конкретным объектам остается сложной задачей.
Целью исследования, ведущегося сотрудниками Сколтеха и лаборатории геномики растений ИППИ РАН, состоит в разработке инструментов и протоколов для генетической модификации гречихи. Гречиха — одна из важнейших сельскохозяйственных культур России, однако, несмотря на это, в её селекции практически не используются биотехнологические методы.
Этот образец растения гречихи, зараженные агробактерией Agrobacterium rhizogenes, несущей вектор с геном зеленого флуоресцентного белка (GFP). Это очень широко используемый в биологии и биотехнологии маркер, флуоресценция в нём возбуждается УФ-светом, позволяя легко визуализировать структуры, в которых он находится. В данном случае агробактерия способствует вставлению этого гена в геном гречихи, и в клетках, в которых это произошло (и во всех потомках этих клеток!), начинает нарабатываться белок GFP. Помимо GFP, в вектор вставлен ген, придающий устойчивость к гербициду basta. Зараженные агробактерией кусочки растения пересаживают на среду, содержащую этот гербицид, создавая селективное преимущество клеткам, в геноме которых произошла вставка и они начинают делиться, производя трансгенные корни (такие корни называют бородатые корни, hairy roots, они являются результатом действия агробактерии на растение). Из корней мы в дальнейшем планируем регенерировать целые растения. Отработка методик трансформации и регенерации откроет путь к генетическому редактированию гречихи. Для этого надо использовать вектора, несущие не только GFP и ген устойчивости к гербициду, но и редактирующие конструкции (ген нуклеазы Cas9 и гидовые РНК).